副溶血性弧菌细菌生化鉴定盒(18种×5次)(SN/T 0173-2010)
一)整套试剂及用品
鉴定生化反应的24种试剂(表1)、5瓶0.85%无菌生理盐水、1瓶0.5 McFarland的浊度管、5支一次性吸管。
二)西林瓶的使用方法
开启西林瓶前，用75%酒精棉消毒西林瓶表面，在无菌条件下，按铝盖上的箭头方向打开铝盖，撕开铝盖，打开西林瓶胶塞(如图1)。所有的西林瓶在使用后均高压灭菌后方可弃去。
三)副溶血性弧菌生化鉴定盒的详细使用方法
注意：如有特殊的接种方式、培养时间、温度或培养方式，请详见每种生化鉴定管附带的使用说明。
副溶血性弧菌为革兰氏阴性无芽胞杆菌，易呈多形态，有棒状、弧状、卵圆状、球状、丝状等，排列不规则，一般大小为0.3～0.7µm×1～2µm，单端一根鞭毛，有动力，运动活泼，两端浓染，在固体培养条件下能生长周鞭毛。菌落常为隆起，圆形，稍浑浊不透明，表面光滑，湿润，不产生色素。
挑取平板分离的可疑菌落划线接种3%NaCl胰蛋白胨大豆琼脂平板35－37℃培养18－24h，革兰氏染色镜检，并将新鲜菌苔置于已配备的无菌生理盐水中，与0.5 McFarland的浊度管比浊，将菌悬液制备成0.5McFarland ( 约108cfu/mL )，用吸管吸取2滴（约0.06mL）菌悬液加入每种微量生化管内。将已接种的西林瓶再套上胶塞，一般采用全加塞（如图2左两瓶所示），特殊情况在下表注明采用半加塞（如图2右两瓶所示），直立于内托的凹槽内（如图2），或放置于合适的瓶架中，于35－37℃培养箱中培养，结果观察见表1。
注意：如有特殊的接种方式、培养时间、温度或培养方式，请详见每种生化鉴定管附带的使用说明。
表1
产品名称 | 结果判定 | 结果观察 温度、时间（小时） | 使用说明 |
阳性 | 阴性 |
氧化酶试剂 | 蓝紫色 | 不变色 | 30秒 | 滴加1滴试剂到一小块洁净滤纸上，以刚刚浸湿为宜；用玻棒或接种环（铂或塑料）挑取适量新鲜菌苔涂在纸片上。 |
1%NaCl三糖铁琼脂 | 产气有气泡， 产酸变黄色， 产硫化氢变黑色， 有动力扩散生长 | 无气泡， 不变色 无扩散生长 | 35－37℃、24 | 用接种针挑取新鲜菌苔穿刺，穿刺完毕后在斜面上划“之”字形接种，竖立培育。西林瓶半加塞（如图2右两瓶所示）后竖立培育。 |
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无盐胨水、3％NaCl胨水、6％NaCl胨水、8％NaCl胨水、10％NaCl胨水 | 生长 | 不生长 | 35－37℃、24 | |
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3%NaCl蔗糖 | 黄色 | 紫色 | 35－37℃、8－24 | |
1%NaCl赖氨酸脱羧酶 1%NaCl鸟氨酸脱羧酶 |
试验管蓝绿色， 对照管变黄 | 试验管与对照管均变黄 | 35－37℃、18－24 | 每株被检菌应同时接种氨基酸对照管一支，并加灭菌液体石蜡3－4滴覆盖培养基表面。培养18－24小时，未见阳性结果，继续培养4天，再做最终结果判定。 |
1%NaCl精氨酸双水解酶 |
试验管蓝绿色， 对照管变黄 | 试验管与对照 管均变黄色 | 35－37℃、24—48 | 同上，同时接种氨基酸对照管一支，并加灭菌液体石蜡3－4滴覆盖培养基表面。试验管变蓝绿色，对照管变黄为阳性，两管均为黄色为阴性，作假单胞菌属鉴定时不需覆盖液体石蜡。 |
β－半乳糖苷（ONPG） | 深黄色 | 淡黄色或无色 | 35－37℃、12－24 | |
3%胰蛋白胨大豆琼脂斜面（42℃生长） | 生长 | 不生长 | 42℃、24 | |
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OF( Hugh-leifson) | | | 35－37℃、24—48 | 被检菌同时接种两支生化管，其中一支加灭菌液体石蜡5-8滴覆盖表面。两支管均为黄色判断为发酵型细菌；加石蜡管不变黄，而未加石蜡管变黄为氧化型细菌；两支管均不变黄为产碱型细菌。 |
V-P 半固体 | 动力：扩散生长，VP：滴加VP试剂后变红色 | 动力：无扩散生长， VP：滴加VP试剂后变红色 | 35－37℃、24—48 | 用接种针挑取新鲜菌苔穿刺接种，竖立培育。 培养后依次加入8滴VP试剂甲液及4滴乙液，混匀，再培养10－20分钟观察结果。 |
1%NaCl蛋白胨水 | 红色 | 不变色 | 35－37℃、24—48 | 西林瓶西林瓶半加塞（如图2右两瓶所示）培养后加靛基质试剂2-3滴，立即观察结果。 |
备注：本鉴定盒是按照betway必威西汉姆联官网产品目录中的品种成份从左到右的顺序摆放。
四）副溶血性弧菌的生化特性见表2
表2 副溶血性弧菌的生化性状
试验项目 | 结果 |
革兰氏染色镜检 | 阴性，无芽胞，呈棒状、弧状、卵圆状 |
氧化酶 | + |
3%NaCl三糖铁琼脂 | 底层变黄不变黑，不产气，斜面不变色或红色加深，穿刺接种处扩散生长 |
无盐胨水 | －微弱生长 |
3% NaCl胨水 | + |
6% NaCl胨水 | + |
8% NaCl胨水 | + |
10％NaCl胨水 | －或微弱生长 |
3%NaCl蔗糖 | + |
靛基质 | + |
3%NaCl赖氨酸脱羧酶 | + |
3%NaCl赖氨酸脱羧酶 | + |
3%NaCl精氨酸双水解酶 | － |
V-P | － |
动力 | + |
β－半乳糖苷（ONPG） | － |
42℃生长 | + |
OF ( Hugh-leifson) | 不分解 |